鸡胚小肠上皮细胞的体外分离培养和鉴定

本试验旨在提供鸡小肠上皮细胞的体外分离方法,为进一步研究鸡肠道疾病的致病机理、鸡肠道营养物质转运吸收与免疫机理提供模型。本试验采用组织块培养法来分离培养鸡小肠上皮细胞。运用刮除法、酶消化法、有限稀释法纯化鸡小肠上皮细胞。利用噻唑蓝(MTT)法来鉴定鸡小肠上皮细胞生长情况。通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测鸡小肠上皮细胞特异性基因的表达来鉴定鸡小肠上皮细胞。结果表明:1)采用组织块细胞培养法能够成功获得鸡小肠上皮细胞系。2)接种组织块8h内鸡小肠上皮细胞开始大量增殖。3)鸡小肠上皮细胞的生长曲线为"S"形,符合细胞增殖规律。4)传至第5代的鸡小肠上皮细胞体积开始变大,细胞形态模糊并开始衰老凋亡;细胞传代时进行接种,大量的细胞未贴壁。综上所述,采用在6孔板内接种鸡小肠组织快,能够获得具有稳定性的鸡小肠上皮细胞,为鸡肠道疾病致病机理、鸡肠道营养物质转运吸收和永生化鸡小肠上皮细胞提供细胞素材。