沙棘总黄酮、槲皮素对鸡成骨细胞碱性磷酸酶活性作用机制的体外研究

本试验旨在研究在体外培养条件下沙棘总黄酮（totalflavonesofHippophaerhamnoides，TFH）及槲皮素（quercetin）对爱拔益加（AA）肉鸡鸡胚成骨细胞碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）活性的影响及其作用机制。成骨细胞分别采用基础培养液、基础培养液添加β-雌二醇(β-estradiol，E2)、TFH或槲皮素培养细胞24h；细胞经雌激素受体（estrogenreceptor，ER）拮抗剂处理2h，再分别于基础培养液、基础培养液添加TFH或槲皮素中培养24h；细胞经胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedkinase，ERK)抑制剂处理2h，再分别于基础培养液、基础培养液添加TFH或槲皮素培养24h；收集细胞，测定细胞ALP活性。基础培养液添加TFH、槲皮素，于孵育0、2、5、15、30、60min6个时间点收集细胞，ELASA法测定磷酸化胞外信号调节激酶（phosphorylatedextracellular-regulatedkinase，p-ERK）浓度。细胞采用基础培养液培养细胞24h后经基础培养液、基础培养液分别添加E2、TFH、槲皮素培养细胞30min；经ER拮抗剂处理15min，再分别于基础培养液、基础培养液添加E2、TFH或槲皮素培养30min；收集细胞，ELASA法测定p-ERK浓度。结果表明：1）培养液添加TFH、槲皮素可以显著提高ALP活性(P<0.05)，ER拮抗剂、MEK抑制剂可完全阻断这2种黄酮的作用(P<0.05)；2）培养液添加TFH在培养后5、15min，槲皮素在培养后2、5、15、30、60minERK磷酸化水平显著提高(P<0.05)；3）培养液添加TFH、槲皮素可显著提高细胞ERK磷酸化水平(P<0.05)，ER拮抗剂可完全阻断这一作用(P<0.05)。结果提示：TFH、槲皮素可以显著提高ALP活性和ERK磷酸化水平，具有雌激素样作用，二者可能是通过ER途径和ERK途径调节ALP活性。