一种快速、特异性检测小麦中链格孢菌（Alternariaalternata）的巢式PCR方法

为建立检测小麦中链格孢菌(Alternariaalternata)的方法,从河南省小麦黑胚籽粒上分离得到7个优势A.alternata病原菌株,对其rDNA的内部转录间隔区序列(ITS)进行测序,序列比较表明,分离到的病原菌株与GenBank公布的A.alternata的ITS区序列一致性达到99%~100%。根据Alternaria属菌株(A.alternata、A.tenuis、A.tenuissima)和麦类根腐离蠕孢菌(Bipolarissorokiniana)的ITS序列比对结果,设计出1对A.alternata特异性引物Aa1F/Aa1R。利用多种河南省小麦的主要病原真菌对该引物的特异性进行验证,只有在A.alternata中能特异性地扩增出1条443bp的DNA片段。以真菌通用引物ITS1/ITS4为外侧引物、特异性引物Aa1F/Aa1R为内侧引物进行巢式PCR扩增,能检测到A.alternataDNA的最低质量浓度为50pg/μL。因此,建立的巢式PCR方法能够快速、特异地检测小麦中的A.alternata。