鸡PD-1胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定

为研究鸡程序性细胞死亡因子1(PD-1)胞外区的生物学活性,根据GenBank中的鸡PD-1基因序列,经生物信息学比对分析,设计鸡PD-1胞外区特异性克隆引物,扩增目的基因,连接原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达载体pET-28a-PD-1,转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,并对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,对表达产物进行SDS-PAGE和Westernblot分析,应用流式细胞术对所获得重组蛋白的生物学活性进行鉴定。结果显示,成功克隆了鸡PD-1胞外区基因;SDS-PAGE和Westernblot分析结果表明,37℃、0.1mmol/LIPTG诱导4h时,PD-1胞外区融合蛋白表达量最高,以包涵体形式存在;流式细胞术分析结果表明,PD-1胞外区重组蛋白具有一定的生物学活性。