应用alc蛋白基因开关系统在糙皮侧耳中表达绿色荧光

为探明担子菌糙皮侧耳(Pleurotusostreatus)中是否存在与构巢曲霉相似的乙醇代谢调控机制，及能否在糙皮侧耳中应用构巢曲霉alc基因开关系统调控表达外源基因，从糙皮侧耳PC15v2.0基因组数据库中电子克隆得到其假拟乙醇脱氢酶基因(alcA)及其上游序列，该基因上游1317bp序列中含有1个正向和2个反向调控因子AlcR蛋白的特异性结合位点序列。将构建的含有alcA基因启动子控制绿色荧光蛋白基因表达的质粒pEGFP-C1-PalcA转入糙皮侧耳天达300中，转化子在含有葡萄糖的培养基中没有绿色荧光蛋白表达，在含有乙醇的培养基中则有绿色荧光蛋白表达。综合上述，糙皮侧耳的乙醇代谢调控机制与构巢曲霉相似，仅用构巢曲霉的alcA基因启动子替代目的基因的启动子即可在糙皮侧耳中有效调控目的基因的表达。