抗有机磷农药单链抗体cDNA文库的构建与鉴定

为了获得针对不同有机磷农药的单链抗体，以人工合成的2种有机磷农药（杀螟硫磷和毒死蜱）抗原免疫小鼠，测定抗血清效价后，提取小鼠脾细胞总RNA，设计引物，通过RT-PCR扩增得到片段大小分别约为400bp和700bp的小鼠重链、轻链可变区基因，再利用融合PCR连接重链轻链可变区，构建抗有机磷的单链抗体cDNA文库，片段约为1100bp。将构建的cDNA文库与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α，测序分析表明，所构建的文库片段互补决定区序列变化明显，多样性好，为进一步筛选抗有机磷的高特异性、高亲和力单链抗体奠定了基础。