农杆菌介导小麦遗传转化影响因素的研究

选用河南科技学院近年来选育的小麦品种百农160的成熟胚愈伤组织和农杆菌菌株LBA4404,对农杆菌介导遗传转化中农杆菌浓度、感染时间、乙酰丁香酮浓度、头孢霉素质量浓度等几个重要影响因素进行了研究,建立小麦高效转化体系。结果表明,菌液OD600=0.6,侵染时间30min时对愈伤组织的生存和转化最有利;浓度为200μmol/L的乙酰丁香酮可显著提高抗性愈伤再生率;随着头孢霉素浓度的升高,愈伤组织出现褐化,生长缓慢,再生率低,所以在有效抑制农杆菌的浓度范围内,尽量采取较低的质量浓度。在后期的抑菌分化筛选中,在继代培养基中添加头孢霉素的质量浓度为500mg/L,继代扩增筛选培养2个月,每10～15d换一次培养基;而在分化培养基中添加200mg/L头孢霉素,即可获得再生率高的抗性愈伤。最适条件下转化频率达2.36%。