牙龈卟啉单胞菌FimA蛋白和IL-15真核共表达质粒的构建与鉴定

目的构建含编码牙龈卟啉单胞菌FimA蛋白和IL-15基因的真核共表达质粒，并检测其在哺乳动物细胞中的表达。方法应用基因重组技术，构建真核表达载体pIRES-fimA和真核共表达载体pIRES-fimA:IL15，通过酶切、PCR及DNA序列测定鉴定获得的质粒，用Lipofectamine2000介导转染CHO细胞，用Westernblot检测重组质粒在哺乳动物中的表达，酶联免疫吸附试验检测培养上清中的蛋白表达。结果PCR扩增获得的fimA和IL-15目的基因与预计相同，定向插入真核表达质粒pIRES中，插入位相正确，未改变阅读框架。转染的CHO细胞能够检测到目的基因的表达，在培养上清中也可以检测到蛋白质的表达。结论本实验成功构建了牙龈卟啉单胞菌FimA蛋白和IL-15的真核共表达质粒pIRES-fimA:IL15，为研制增强免疫应答的抗牙龈卟啉单胞菌DNA疫苗奠定了基础。