MHC-Ⅰ类链相关基因A真核表达载体的构建及稳定转染舌鳞癌细胞的实验研究

目的构建人类MHC-Ⅰ类链相关基因A（MICA）的真核表达载体，转染人舌鳞癌脑高转移Tca8113-Tb细胞，建立稳定过表达MICA基因的口腔鳞癌细胞系。方法采用PCR技术扩增pCMV-SPORT6-MICA中编码MICA基因的cDNA序列，重组至有绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1，构建最终的表达载体pEGFP-N1-MICA，脂质体法转染Tca8113-Tb细胞，G418筛选，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达，有限稀释法建立稳定过表达MICA基因的Tca8113-Tb细胞系，RT-PCR、realtimePCR和免疫细胞化学检测MICA在该细胞中的表达。结果通过PCR技术获取了MICA基因并成功克隆入载体，测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染的细胞可见绿色荧光蛋白表达，RT-PCR、realtimePCR及免疫细胞化学检测到目的基因MICA在转染细胞中为过表达。结论pEGFP-N1-MICA真核表达载体的成功构建与稳定转染Tca8113-Tb细胞系的建立，为进一步研究该基因的功能奠定了良好的实验基础。