人血小板源性生长因子-B基因转染犬牙龈成纤维细胞的瞬时表达检测

目的检测携带人血小板源性生长因子-B（hPDGF-B）基因的真核表达质粒在Beagle犬牙龈成纤维细胞内的表达。方法扩增和鉴定携带hPDGF-B基因的质粒EX-A0380-M03，脂质体介导的方法转染Bealge犬牙龈成纤维细胞，RT-PCR、免疫细胞化学、ELISA以及Westernblot检测hPDGF-BB的表达。结果EX-A0380-M03所携带的目的基因为hPDGF-B基因，转染牙龈成纤维细胞24h后可观察到细胞内的绿色荧光蛋白，48h转染效率可达18%~38%。RT-PCR、免疫细胞化学、ELISA均能检测到细胞表达hPDGF-B。Westernblot证实所表达的蛋白为融合蛋白。结论携带hPDGF-B基因的真核表达载体EX-A0380-M03能被转入牙龈成纤维细胞，并成功表达一种融合蛋白。