牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH），并将其置于大肠杆菌中作融合表达。方法利用PCR技术，克隆GAPDH，插入克隆载体pMD18-T中得到克隆重组子pMD18-T-GAPDH。克隆重组子与表达载体pET-32a双酶切后连接构建表达质粒pET-32a-GAPDH。重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞，以不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达融合蛋白。结果核酸序列测定与分析表明：表达重组子pET-32a-GAPDH与NCBI核酸数据库中收录的GAPDH序列同源性达99.802%；在最佳浓度的IPTG诱导下，GAPDH可高效表达。结论本实验成功克隆了牙龈卟啉单胞菌GAPDH基因，并在大肠杆菌中表达了GAPDH蛋白，为后续实验研究GAPDH的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础。