牙龈卟啉单胞菌基因真核表达载体构建及其在哺乳动物细胞中的表达

目的　构建分泌型牙龈卟啉单胞菌牙龈蛋白酶K基因的真核表达载体VR1020/KGPcd,并检测其在哺乳动物细胞中的表达及分泌情况。方法　应用基因重组方法,构建真核表达载体VR1020/KGPcd。然后用Lipofectamine2000介导瞬时转染COS7细胞,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光检测重组质粒的基因转录和蛋白表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养上清中蛋白分泌情况。结果　转染的COS7细胞中可检测到目的基因的转录和表达,并且在培养的上清中检测到其表达的蛋白质。结论　成功构建了可分泌表达的真核表达载体VR1020/KGPcd,并在哺乳动物细胞中能够正确转录和翻译,培养上清中可检测到正确表达的目的蛋白,这为其作为基因疫苗免疫动物奠定了基础。