骨保护素修饰的Beagle犬骨髓基质细胞表达体系的建立与鉴定

目的利用pSecTag2/B-OPG真核分泌表达穿梭载体，建立经骨保护素基因（OPG）修饰的Beagle犬骨髓基质细胞（BMSC）瞬时表达体系并检测其表达能力，为基因工程与组织工程联合治疗牙周病提供细胞基础。方法体外分离、培养Beagle犬BMSC，通过脂质体法将已鉴定的目的基因瞬时转染至BMSC，并用RT-PCR鉴定OPG是否有录，同时通过Westernblot方法检测OPG在6周内的表达水平。结果重组质粒pSecTag2/B-OPG经HindⅢ单酶切及EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切，电泳显示切下的片段均与预期大小相符，经测序证实此基因与GeneBank中[gi：33878056]提供的序列一致；鉴定正确的重组质粒在BMSC中有转录，并且在39d内都明显有OPG表达。结论建立了骨保护素基因修饰的骨髓基质细胞瞬时表达体系。