牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因的克隆及表达纯化

目的克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因并使其在大肠杆菌中正确表达。方法利用PCR方法克隆牙龈卟啉单胞菌fimA基因，构建其原核表达质粒pT-BAD/fimA，获得其在大肠杆菌中的表达，基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定重组蛋白。以不同质量浓度咪唑缓冲液（250、200、150、100、50μmol·L-1）洗脱结合在His-tag纯化柱的目的蛋白，选择最佳洗脱质量浓度。结果克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列呈现99.9%同源性；诱导表达后可观察到相对分子量3.8×104的融合蛋白，经MALDI-TOF-MS检测进一步证实为FimA蛋白。100μmol·L-1咪唑缓冲液洗脱得到的蛋白质纯度最高，其纯度为95%。结论本实验成功克隆了fimA基因，并获得在大肠杆菌中的正确表达，同时得到纯度较高的FimA蛋白，为后续研制增强免疫应答的高效牙周炎真核表达质粒奠定了基础。