亚甲基四氢叶酸还原酶基因在小鼠胚胎腭突间充质细胞中沉默效应的研究

目的构建亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）特异性小干扰RNA（siRNA）真核表达载体，体外观察其对MTHFR基因的沉默作用。方法采用基因克隆技术，将合成的特异性MTHFRRNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体PsiRNA-Hh1neo_G2，构建MTHFRsiRNA真核表达载体。应用核转染技术将PsiRNA-MTHFR重组质粒分别导入原代培养的小鼠胚胎腭突间充质（MEPM）细胞。48h和5d后用实时定量聚合酶链反应（Real-TimePCR）和Westernblot技术检测MEPM细胞内MTHFRmRNA及蛋白水平的表达情况。结果成功构建PsiRNA-MTHFR真核表达载体。经检测48h和5d后转染PsiRNA-MTHFR的MEPM细胞MTHFRmRNA及蛋白表达均显著下调。结论构建的RNA干扰真核表达载体能明显干扰MTHFRmRNA及蛋白的表达，为进一步研究MTHFR的功能以及其调控胚胎腭突融合的机制奠定基础。