小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达

目的构建小鼠增强型绿色荧光蛋白（EGFP）-过氧化物酶体增长因子活化受体（PPAR）γ2基因的腺病毒重组体，并检测其在感染病毒的小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）中的表达。方法从pcDNAflagPPARγ质粒上切取目的片段PPARγ2，克隆入pEGFP-C1和pEGFP-N1，以pEGFP-C1-PPARγ2为模板通过PCR技术获得EGFP-PPARγ2基因，酶切DC315质粒，获得DC315-EGFP-PPARγ2质粒，在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞，包装产生复制缺陷型重组腺病毒Ad-EGFP-PPARγ2，酶切鉴定证实构建成功。转染HEK293细胞并检测其体外表达情况，经HEK293细胞扩增后，测定病毒滴度，转染小鼠BMSC，72h后鉴定其成脂分化情况。结果将pEGFP-C1-PPARγ2和pEGFP-N1-PPARγ2通过脂质体转染入HEK293细胞后，在倒置相差显微镜下观察，前者在细胞核内有较强的绿色荧光，后者的荧光强度则极低。对重组腺病毒进行酶切和PCR鉴定，证实含小鼠EGFP-PPARγ2的Ad5腺病毒载体构建成功。在倒置相差显微镜下观察到BMSC细胞核内有绿色荧光。结论成功构建含小鼠EGFP-PPARγ2的重组Ad5腺病毒载体，为基因辅助的脂肪组织工程技术、抗肿瘤研究等提供了安全有效的转基因载体。