利用抑制消减杂交技术构建变形链球菌高毒力株特异的基因文库

目的　构建c血清型变形链球菌高毒力株特异的基因文库,为变形链球菌毒力基因的筛选奠定基础。方法　从一对c血清型变形链球菌高、低毒力株中提取基因组DNA,用四碱基限制性内切酶酶切,以高毒力株的DNA酶切产物为testerDNA,低毒力株的DNA酶切产物为driverDNA,testerDNA连接接头后与driverDNA进行抑制消减杂交,并检测连接效率与消减效率。将获得的消减PCR产物与pCR2.1载体连接,转化E.coliTOP10F′感受态细胞,进行蓝白筛选。结果　从识别四碱基序列的限制性内切酶中,筛选出AluⅠ,用于制备变形链球菌基因组DNA的代表性片段,产生的酶切产物位于0·1~2.0kb。testerDNA与接头的连接效率大于25%,抑制消减杂交后消减效率检测显示,同时存在于tester与driverDNA中的23SrRNA基因在消减组中出现时间较未消减组晚6个循环,将消减PCR产物克隆后,挑取96个转化子,构建高毒力株特异的基因文库。结论　利用抑制消减杂交技术,进行c血清型变形链球菌高、低毒力株之间基因组DNA的比较,初次构建了高毒力株特异的基因文库。