腭裂相关基因甲状腺转录因子-2转基因小鼠的生物学特征

目的建立腭裂相关基因甲状腺转录因子-2（TTF-2）转基因小鼠模型，利用转基因动物模型研究TTF-2基因的活动规律和表达模式发生变化时对腭突发育过程产生的影响。方法采用聚合酶链反应法扩增C57BL/6J小鼠基因组TTF-2基因，将其定向插入pBROAD3-mcs载体，构建重组表达质粒pBROAD3-TTF-2，利用显微注射技术把线性化表达载体注射到受精卵的雄原核中，建立TTF-2转基因小鼠。利用特异引物聚合酶链反应和Southernblot方法鉴定转基因小鼠的基因型，采用免疫组织化学法检测TTF-2基因在转基因小鼠腭突组织中的表达。结果共注射原核期受精卵982枚，发育为2-细胞胚胎的580枚，均移植入48个假孕受体昆明白小鼠中，得到胎鼠68只。提取基因组DNA，发现有13只转基因阳性的胎鼠。免疫组织化学法检测显示TTF-2在转基因小鼠腭突中持续表达。结论通过显微注射法使外源基因pBROAD3-TTF-2整合入小鼠基因组中，成功建立了腭突持续表达TTF-2的转基因小鼠模型，其表现型为腭裂。