Ⅰ型跨膜蛋白α亚型缺失突变体对人牙周膜成纤维细胞周期的影响

目的研究内质网信号通路Ⅰ型跨膜蛋白α亚型（IRE1α）缺失突变体对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）细胞周期的影响。方法在成功构建人IRE1α基因全长重组质粒的基础上，采用重叠聚合酶链反应构建其两个主要功能域Kinase和Rnase的缺失突变体（pD-Kinase、pD-Rnase）；然后分别染入hPDLFs细胞，Westernblot检测重组基因表达情况，流式细胞仪（FCM）检测转染后hPDLFs细胞的细胞周期变化。结果酶切及测序结果证实构建的IRE1α缺失突变体重组质粒构建成功；Westernblot分析结果显示，3种重组基因均能正确表达；FCM结果分析显示：与衣霉素（TM）组相比，IRE1α实验组hPDLFs细胞S期比例增加而G1期减少（P<0.05）；D-Rnase突变体组hPDLFs细胞S期比例减少而G1期增加（P<0.05）；D-Kinase突变体组对hPDLFS细胞的增殖和各周期分布影响则无显著差异（P>0.05）。结论在内质网应激状态下，IRE1α可促进hPDLFs细胞从G1期进入S期，D-Rnase突变体导致hPDLFs细胞生长阻滞于G1期，而D-Kinase则对hPDLFS细胞周期分布无明显影响。