血小板生成素在枯草杆菌中的表达分泌及前肽作用

利用PCR方法扩增得到枯草杆菌本身的表达调控序列SP（含有信号肽）和Pro序列（包含信号肽和前肽），分别与血小板生成素(TPO)结构基因及枯草杆菌载体片段连接，构建两个重组TPO枯草杆菌表达载体，转化受体菌，得到DB403（SP-TPO）和DB403（Pro-TPO）重组克隆，比较有无前肽对其表达分泌的作用.用ELISA和WesternBlot检测TPO的表达分泌，发现DB403（Pro-TPO）能够表达分泌TPO，而DB403（SP-TPO）未发现TPO的分泌.对小鼠腹腔注射DB403（Pro-TPO）发酵浓缩液，发现能够明显增加血小板数目，与自身对照相比增加84.2％，与生理盐水对照比较增加99.7％.以上实验说明Pro-TPO能够表达分泌有明显活性的TPO蛋白，而且前肽对外源蛋白的分泌是必要的.