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华南农业大学学报 2007
H1亚型猪流感病毒广东株HA基因的原核表达DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2007.01.025, PP. 105-108 Keywords: 猪流感病毒,HA基因,克隆,原核表达,亚型,猪流感,病毒,广东,基因,原核表达,Subtype,InfluenzaVirus,Swine,Gene,Expression,识别,特异性抗体,重组蛋白,免疫印迹,总蛋白,菌体,表达量,重组融合蛋白,高效表达 Abstract: 为了研制猪流感检测试剂和流感亚型特异性单抗筛选所需的重组抗原,本研究克隆和原核表达了H1N1亚型猪流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因.首先采用RT-PCR方法扩增了H1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的HA基因.测序结果表明,扩增的SIVHA基因cDNA长度为1701个核苷酸,共编码566个氨基酸.BLAST分析表明,H1N1亚型SIV广东株HA基因核苷酸序列与GenBank中已发表的中国香港特别行政区、中国大陆、美国分离的经典H1亚型毒株相近,核苷酸序列同源性在89%以上.然后将HA基因的cDNA片段亚克隆至pET32a()表达载体中,构建重组质粒pET32a-H1,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达.SDS-PAGE和凝胶扫描分析表明,HA基因在大肠杆菌中获得了高效表达,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25.2%.经免疫印迹证实重组蛋白可以被SIV特异性抗体所识别.
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