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华南农业大学学报 2009
具生物活性的重组鸡催乳素的制备DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2009.01.019 Keywords: 鸡PRL融合蛋白,表达和纯化,复性,生物活性 Abstract: 将鸡催乳素(PRL)成熟肽cDNA片段插入原核表达载体pRSETA的NheI和HindIII位点之间,构建重组表达质粒pPRL-SCAU.将此质粒转化大肠杆菌Escherichiacoli菌株BL21(DE3),将重组菌在含氨苄青霉素的LB培养基中培养,再经IPTG诱导,可以诱导表达相对分子质量约为24500的重组鸡PRL.经0.1mmol/LIPTG诱导4h后,表达量达到最高,占总菌体蛋白的30%左右.表达的重组鸡PRL含组氨酸标记,以包涵体形式存在,可经50%Ni-NTA树脂分离纯化,然后在透析复性后分离出可溶性部分.将此可溶性重组鸡PRL对3月龄的鸽子在左侧嗉囊处相同位置隔24h2次皮内注射,能够显著促进嗉囊上皮的增生.与天然鸡催乳素的增生效果相比,所表达的重组鸡PRL的生物学活性为天然催乳素的17%至25%.
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