黑曲霉分泌表达载体的构建以及绿色荧光蛋白的表达

采用PCR扩增得到糖化酶基因启动子（PglaA-g）、色氨酸合成酶基因终止子（TtrpC）和潮霉素抗性筛选标记基因，依次连接这些基因元件，获得黑曲Aspergillusniger分泌表达载体pPHT.EGFP基因与黑曲霉表达载体pPHT连接，得到重组表达载体pPHT-EGFP.pPHT-EGFP表达载体通过原生质体转化法转化黑曲霉，经潮霉素抗性筛选、基因组PCR鉴定阳性重组转化子.荧光显微镜观察表明，绿色荧光蛋白成功表达，而且荧光的分布具有一定的规律，主要集中在菌丝顶端、膈膜以及培养基中；固体培养基发出绿色荧光，表明绿色荧光蛋白分泌到培养基中，属于分泌性表达，蛋白分泌的部位主要位于菌丝顶端.