草鱼Smad4基因的克隆、生物信息学分析及反义真核载体的构建

为了研究TGF-β信号传导中的关键蛋白Smad4在草鱼Ctenopharyngodonidellus发育过程中的作用，克隆出草鱼Smad4基因cDNA全序列，其碱基长度为2974bp，其中开放阅读框1644bp，编码547个氨基酸.生物信息学分析结果显示,草鱼Smad4蛋白相对分子质量为59690.3，分子式为C2632H4073N753O791S24，理论等电点为6.5，含有MH1和MH2这2个高度保守的功能结构域.BLAST相似性分析显示，草鱼Smad4蛋白的氨基酸序列与鲤Cyprinuscarpio、斑马鱼Daniorerio的相似性较高，分别为94.23%和92.97%.还将草鱼Smad4基因的开放阅读框片段反向插入表达载体pcDNA3.1(+)，成功构建了反义Smad4基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-Anti-Smad4.