利用双向电泳技术分离节瓜叶片总蛋白的方法研究

【目的】建立适合节瓜叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系.【方法】以节瓜品种“A37毛节瓜”为材料，对蛋白质抽提方法、上样量、凝胶浓度及IPG胶条pH范围等关键因素进行探索与优化.【结果和结论】与TCA/丙酮沉淀法及酚提取法相比，改良酚提取法抽提蛋白质总量较高，纯度最高，SD-PAGE电泳条带明显、清晰，双向电泳图谱蛋白质点最多、清晰均匀、纵横条纹少.利用17cmpH4~7范围IPG胶条、120μg蛋白质上样量、12%凝胶浓度，硝酸银染色获得蛋白质点数丰富、分辨率高、背景清晰且重复性好的双向电泳图谱，检测到节瓜叶片蛋白质点1936个，相对分子质量主要分布于15000~100000之间.初步建立了一套适用于节瓜叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系，为后续开展蛋白质组学研究及其相关工作奠定了基础.