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O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及功能鉴定
DOI: 10.7668/hbnxb.2009.06.003
Keywords: 口蹄疫病毒 ,VP1基因 ,原核表达 ,蛋白复性
Abstract:
为获得具有免疫原性的FMDVVP1蛋白,以O型FMDV重组质粒PMD18T-VP1为模板,利用PCR技术扩增得到O型FMDVVP1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组表达载体,命名为pET-VP1,经PCR和测序鉴定后,用IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析.结果显示,在分子量约为5ku处有1条明显的蛋白条带,且能被口蹄疫阳性血清识别,表达产物通过包涵体纯化后用透析法复性;ELISA检测结果显示,所复性的蛋白具有较高的活性.结果表明,FMDVVP1蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,为开发诊断制剂和疫苗的研制打下基础.
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