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ISSN: 2333-9721
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菜用大黄SRAP-PCR反应体系的优化及验证

DOI: 10.7668/hbnxb.2014.04.017, PP. 105-110

Keywords: 菜用大黄,SRAP-PCR,体系优化

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Abstract:

为建立菜用大黄最佳的SRAP反应体系，进一步对菜用大黄品种进行遗传多样性分析，以菜用大黄基因组DNA为模板，采用单因素与正交设计相结合的方法，对SRAP-PCR扩增体系中的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物和TaqDNA聚合酶浓度5个因素进行优化，并确立菜用大黄SRAP-PCR的最佳体系。结果表明：菜用大黄各因素对反应体系影响大小依次为：引物浓度>Mg2+浓度>dNTPs浓度>TaqDNA聚合酶浓度>DNA用量；最佳反应体系为：25μL反应体系中含10×PCRBuffer2.50μL、模板DNA30ng、Mg2+2.50mmol/L、dNTPs0.25mmol/L、TaqDNA聚合酶0.04U/μL、上下游引物各0.5μmol/L。用8个菜用大黄品种DNA样品对优化的反应体系进行验证，均获得了条带清晰且多态性较好的扩增图谱，证实了该体系的稳定性和可靠性，可用于菜用大黄的遗传多样性分析。

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