应用农杆菌介导的生长点转化方法建立甜瓜遗传转化技术

为探讨甜瓜的遗传转化技术,以甜瓜品种河套蜜瓜腋芽生长点做外植体,利用庆大霉素基因作为筛选基因,对影响农杆菌转化的菌液浓度、转化时间、共培养时间进行了正交试验。通过优化转化条件,建立了农杆菌介导的甜瓜腋芽生长点遗传转化体系。结果表明,采用培养20d的无菌苗,以腋芽作为外植体,预培养1d;用OD600=0.7的菌液转化10min后,黑暗中共培养2d,然后用40mg/L庆大霉素进行筛选;移栽后在叶片上喷洒20mg/L庆大霉素筛选转基因植株,效果最好。通过对庆大霉素抗性苗进行PCR检测,初步验证外源基因已经整合进甜瓜基因组,转化率达到76%,幼苗移栽成活率为76.3%。