4种梨的多酚氧化酶基因克隆及其序列比较

以种不同来源的梨基因组DNA为模板，根据已经发表的多酚氧化酶基因序列设计引物，利用PCR技术，克隆到了鸭梨、雪花梨、砂梨、黄冠梨约1.8kb的完整多酚氧化酶基因，将纯化后的扩增产物克隆到质粒pGEM－Tvector中，转化DH－5α菌，挑选阳性克隆进行测序。利用Clustalx软件对PPO核苷酸序列进行了同源性分析，用DNAStar软件对PPO核苷酸序列进行进化树分析，并进行部分植物PPO氨基酸的同源性分析。结果表明，种梨多酚氧化酶基因的蛋白编码区含有1782个核苷酸，鸭梨基因已经在GenBank上登录，登录号为EU08225.梨多酚氧化酶基因与其他植物中的多酚氧化酶基因有较高的相似性，尤其在铜离子结合部位，所有的植物基本上一致；5种梨的同源性高达98%。基于植物PPO基因核苷酸序列的分子进化树显示，可分为两大类，梨的多酚氧化酶可以与大多数的木本植物聚合成一个组。