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烟草花叶病毒南瓜分离物CP基因的克隆、序列分析及其原核表达
DOI: 10.7668/hbnxb.2010.05.001
Keywords: 南瓜 ,烟草花叶病毒 ,CP基因 ,序列分析 ,原核表达
Abstract:
为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原.采用RT-PCR的方法,用TMV外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,克隆到的基因序列进行分析,并使其在大肠杆菌中表达.结果表明,从该样品中扩增到了TMV的CP基因,说明该样品受到TMV的侵染,首次发现TMV自然侵染南瓜.对CP基因序列测定及分析表明,与GenBank上其他TMV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为86.%～99.0%,推导的氨基酸序列同源性为93.7%～99.4%.根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:32个TMV分离物可分为个组,其中TMV-liaocheng与NakronPathom、Fujian、017等分离物属于Ⅳ组.TMV-liaocheng可能发生过重组.将TMV-liaochengCP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS诱导表达出分子量约20kDa的融合蛋白,并用Ni2+-NTAHis·Bind(R)树脂纯化,纯化后的蛋白可直接用于制备特异性的抗血清,为准确、快速地检测TMV奠定了基础.
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