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ISSN: 2333-9721
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人热休克蛋白10和鼠热休克蛋白10的克隆、序列分析及其原核表达

DOI: 10.7668/hbnxb.2011.03.012, PP. 56-59

Keywords: 热休克蛋白,人热休克蛋白1,鼠热休克蛋白1,基因克隆,原核表达

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Abstract:

提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NSO细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hspl0)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序.结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313bp组成,与报道的人HSPE1mRNA(NM002157)、鼠肌肉HspelmRNA(NM-008303)序列同源性分别为99%,97%,命名为HSPEl-1和Hspel-Ⅰ,序列分析表明,二者之间在核苷酸水平上的同源性为92%,氨基酸水平上的同源性为97%.将上述2种cDNA进行双酶切、亚克隆,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1,转化大肠杆菌并进行了诱导表达.检测结果表明,pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1均能在大肠杆菌中表达,表达蛋白分子量大小约为1kDa,与预期大小一致.Western-Blot结果证实了其为目的蛋白,经镍树脂柱纯化,获得了相应的重组蛋白.为进一步研究这2种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础.

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