基于农杆菌介导法的植物转基因载体的改造

根据植物转基因载体的特点和局限性，利用几种商业化载体进行克隆、酶切和重组，从而重构方便快捷的转基因植物表达载体。首先用PCR方法从pCAMBIA1301质粒中扩增到含启动子CaM35S、完整GusA基因和终止子NOS三部分的片段，经TA克隆重组入pGM-T载体中获得pGM-35S-GUS-NOS重组质粒。然后对来源于新疆沙冬青的抗寒基因AnGPAT片段和pGM-35S-GUS-NOS重组质粒进行双酶切，连接获得中间载体pGM-35S-GPAT-NOS。再对中间载体和双元真核表达载体pCAMBIA2300双酶切后连接，转化入大肠杆菌和农杆菌。经PCR、酶切及测序鉴定后确认得到改造后的植物表达载体p2300-35S-GPAT-NOS。结果表明，这是一种简便、高效、通用、经济的载体重构策略。