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ISSN: 2333-9721
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羊草脂氧合酶同源蛋白基因LcLHP的克隆与表达分析

DOI: 10.7668/hbnxb.2015.04.007, PP. 35-42

Keywords: 羊草,盐碱胁迫,LcLHP,RACE克隆,表达分析

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Abstract:

为验证羊草脂氧合酶同源蛋白基因LcLHP与盐胁迫的关系,利用RACE(RapidamplificationofcDNAends)克隆技术从羊草中克隆得到抗盐碱相关基因脂氧合酶同源蛋白基因(LHP,Lipoxygenasehomologyprotein)的cDNA全长序列,其GenBank登录号为KJ472894。LcLHP基因开放阅读框为537bp,编码178个氨基酸。LcLHP中含有PLAT/LH2结构域,该结构域蛋白家族的许多成员受胁迫诱导。同源性分析显示,LcLHP与互花米草PLAT/LH2家族蛋白脂氧合酶、PLAT植物胁迫结构域包含蛋白等同源性较高,蛋白功能预测显示其N端可能存在信号肽并可能具有酶功能。RT-PCR分析显示,在一定盐碱胁迫条件下,随着处理试剂Na2CO3溶液处理时间的延长,LHP基因在羊草中的表达量呈单峰趋势,在12h时达到峰值;构建重组表达载体pGEX-LcLHP并进行IPTG原核诱导表达培养,获得了GST-LcLHP融合蛋白并用GST抗体进行WesternBlot试验得到验证。

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