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食用向日葵SSR-PCR反应体系的优化
DOI: 10.7668/hbnxb.2015.02.029
Keywords: 食用向日葵 ,SSR-PCR ,体系优化
Abstract:
为建立食用向日葵分子标记反应体系,以食用向日葵四叶期叶片为DNA模板提取材料,采用单因素试验和正交试验设计,对SSR-PCR反应体系中的6因素(10×PCRBuffer、Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和DNA模板)在5水平上进行正交优化试验,并比较了不同浓度Mg2+、TaqDNA聚合酶、模板DNA对扩增效果的影响,结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响为Mg2+>TaqDNA聚合酶(引物)>DNA模板>10×PCRBuffer>dNTPs。最终建立食用向日葵SSR-PCR最佳反应体系为:在总体系为20μL的SSR-PCR反应体系中包括10×PCRBuffer0.2mmol/L、Mg2+2.0mmol/L、dNTPs1.8mmol/L、TaqDNA聚合酶0.2U、DNA50ng、引物1.5mmol/L。
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