高产人参发根系的建立及发根中皂苷Rb1的分离纯化

利用发根农杆菌A4菌株在2年生人参根外植体上直接诱导产生人参发根。对16个人参发根系比生长速率及人参总皂苷含量进行测定，得到3个具有较高比生长速率和人参皂苷含量的发根系。其中发根系R9923具有最高的比生长速率，在连续培养4周后生长量比最初提高了28.8倍。研究R9923发根系的生长曲线和皂苷含量变化规律发现，随着发根生物量的增加，发根中皂苷含量积累得也越多。利用HPLC法测定了R9923发根系中单体皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。生长4周的人参发根总皂苷含量达15.2mg/g，其中人参皂苷Rb1的含量为68.3％，比3年生栽培人参中Rb1含量高1.3倍，可以用于大规模培养。用硅胶柱层析法从人参发根总皂苷中分离提纯人参皂苷Rb1，当洗脱剂中氯仿∶甲醇=7.5∶2.5（体积比）时洗脱效果较好。用硅胶柱法提取的皂苷Rb1纯度为89.95%，得率为72.7%。