人宫颈癌HeLa细胞氧化损伤中溶酶体与线粒体损伤的时间顺序及其意义

目的:探讨溶酶体及线粒体死亡途径在氧化应激诱导HeLa细胞凋亡过程中的时间顺序及其意义，阐明溶酶体膜通透性在氧化应激诱导线粒体凋亡过程中的重要作用。方法：以对数生长期人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象，利用维生素K3（VK3）复制氧化应激模型，实验分为对照组、VK31h、VK33h、VK36h和VK312h作用组。MTT法检测各组细胞生存率；′，7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧（ROS）水平，吖啶橙（AO）染色观察溶酶体膜通透性，罗丹明123染色检测线粒体膜电势(ΔΨm)，Westernblotting法检测凋亡相关蛋白caspase-3活化片段的表达。结果：与对照组比较，VK36和12h组HeLa细胞生存率降低（P<0.05）。Westernblotting法检测，与对照组比较，VK36和12h组HeLa细胞内caspase-3活化片段表达水平增加（P<0.05）。DCFH-DA染色，VK3作用1、3及6h，HeLa细胞内绿色荧光增强。AO染色，VK33　h和6h组可见HeLa细胞的溶酶体内红色颗粒状荧光减弱，细胞浆绿色荧光增强。罗丹明123染色，VK36h组可见HeLa细胞浆内红色荧光强度明显降低(提示ΔΨm下降)。结论：氧化损伤能够诱导溶酶体及线粒体死亡途径，并且溶酶体的变化先于线粒体，提示溶酶体通透性在氧化应激诱导线粒体凋亡过程中具有重要作用。