人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

目的：构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒，并诱导和鉴定其融合蛋白的表达，为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法：以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板，PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入E.coli？BL21中，采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达，采用Westernblotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果：EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段（5000bp）和PAK61-55(165bp)、PAK656-210(465bp)、PAK6211-410（600bp）及PAK6385-681（891bp）4个片段。Westernblotting检测，PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32000、43000、48000和60000。结论：成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。