anoctamin1在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其离子通道特性

目的：探讨anoctamin1在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达情况，分析其离子通道特性，为研究钙激活氯离子通道的生理功能提供实验依据。方法：PCR方法获得anoctamin1编码区基因，构建pcDNA3.1-anoctamin1真核表达载体。脂质体转染anoctamin1至CHO中，抗生素筛选获取稳定表达anoctamin1的CHO株。应用RT-PCR技术和倒置荧光显微镜检测anoctamin1于CHO中的表达和分布情况。应用卤族元素敏感的黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L检测anoctamin1离子通道的功能。以加入calcimycin和高浓度碘离子的PBS缓冲液的为实验组，未加入calcimycin和高浓度碘离子的PBS缓冲液的为对照组。结果：限制性内切酶酶切后的琼脂糖凝胶电泳和测序，目的基因anoctamin1克隆至真核表达载体pcDNA3.1；RT-PCR和倒置荧光显微镜观察，CHO在mRNA和蛋白水平表达anoctamin1，且anoctamin1蛋白主要表达于CHO膜上；荧光淬灭动力学实验，CHO表达的anoctamin1具有转运碘离子的作用，且实验组碘离子转运速度显著高于对照组(P<0.05)。结论：anoctamin1可高效表达于CHO膜；CHO表达的anoctamin1具有经典钙激活氯离子通道特性。