Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良

目的：通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞（OC）的高效培养体系。方法：向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg？L-1M-CSF、100μg?L-1RANKL和1×10-8mol？L-11α,25-（OH）2D3，于5%CO2、37℃孵箱中培养12d，每3　d换液1次，每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化，并利用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、FITC-phalloidin染色和免疫荧光染色鉴定OC是否成熟并具有吞噬功能。结果：通过改良培养方法，在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和HE染色，诱导第12天时OC胞体覆盖培养面积的70%；FITC-phalloidin染色，伴随着OC成熟，伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形，最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围；免疫荧光染色，诱导12d后OC表达的降钙素受体(CTR)较前体细胞显著增加，TRAP染色显示OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的OC成熟并具有吞噬功能。结论：本实验通过改良培养方法，联合应用细胞因子50μg？L-1M-CSF、100μg？L-1RANKL和1×10-8？mol？L-11α,25-（OH）2D3建立了体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟OC的高效培养体系。