pshuttle-Egr-1-hSmac质粒联合X线照射对乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖的抑制作用

目的:构建pshuttle-Egr-1-hSmac质粒并转染人乳腺癌MDA-MB-435细胞，观察其抑制肿瘤细胞的辐射增敏作用。方法：转染pshuttle-Egr-1-hSmac质粒的MDA-MB-435细胞经过2GyX线照射不同时间（4、8、12、24和48h）和0.5~5.0GyX线照射后24h收集细胞，采用RT-PCR和Westernblotting法检测SmacmRNA及其蛋白表达。将细胞分为对照组、pshuttle质粒组、pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组、2Gy组、pshuttle+2.0Gy组和pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0Gy组，MTT法检测各组细胞增殖；克隆形成实验检测细胞存活能力；AnnexinⅤ-FITC双染法检测细胞凋亡；PI单染法检测细胞周期。结果:对照组和pshuttle质粒组MDA-MB-435细胞中SmacmRNA无表达，而pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组MDA-MB-435细胞SmacmRNA表达水平随时间延长逐渐升高，于24和48h时表达水平最高；经0.5~5.0GyX线照射后24hMDA-MB-435细胞SmacmRNA表达水平随照射剂量增加而逐渐增加，在2.0和5.0GyX线照射后SmacmRNA表达水平最高。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组4、8、12和24h后Smac蛋白表达水平逐渐升高，24h后表达水平最高。经过0、0.5、1.0、2.0和5.0GyX线照射后24hSmac蛋白表达水平逐渐升高，尤其以5.0GyX线照射时表达水平最高。MTT法检测时程效应，2.0Gy、pshuttle+2.0Gy和pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0Gy质粒组24、48和72h细胞A490值明显低于对照组（P<0.01）；剂量效应，pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组1.0～5.0GyX线照射后，MDA-MB-435细胞A490值明显低于0GyX线照射(P<0.05或P<0.01)。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组细胞存活分数明显低于对照组（P<0.01）。pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0Gy组细胞凋亡率明显高于2.0Gy组（P<0.01），G0/G1期和S期细胞百分率明显低于2.0Gy照射组（P<0.01），G2/M期细胞百分率明显高于2.0Gy组（P<0.01）。结论：X线照射能增加pshuttle-Egr-1-hSmac质粒转染的MDA-MB-435细胞有效表达SmacmRNA及蛋白，能抑制细胞存活，且诱导G2/M期阻滞和凋亡增加；Smac基因联合放射治疗可明显增加乳腺癌细胞的放射敏感性。