Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的：研究骨肉瘤MG-63细胞中Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶（TG2）的抗凋亡作用，探讨其抑制肿瘤细胞凋亡的机制。方法：设计针对TG2的siRNA，建立骨肉瘤MG-63细胞体外缺氧培养模型，分为常氧组（细胞在常氧下培养）、单纯缺氧组（细胞在缺氧培养箱里培养）、对照siRNA缺氧组（转染对照siRNA后在缺氧培养箱里培养）和TG2siRNA缺氧组（转染TG2siRNA后在缺氧培养箱里培养）。观察各组骨肉瘤MG-63细胞在缺氧培养不同时间(6、12、24、48和72h)后Bax和CytC的表达及细胞凋亡率。微量滴定法检测TG2活性，RT-PCR法检测TG2和BaxmRNA表达水平，免疫组织化学法检测TG2和Bax蛋白在细胞内的分布，Westernblotting法检测TG2、Bax和CytC蛋白表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与常氧组比较，单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组细胞TG2活性、TG2mRNA和蛋白表达水平明显增强(P<0.01)，并随缺氧时间延长逐渐升高（P<0.01）；BaxmRNA表达水平变化不明显(P>0.05)，但Bax蛋白表达水平明显下降(P<0.01)，细胞胞浆和线粒体内CytC蛋白水平及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）。与单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组比较，TG2siRNA缺氧组细胞各时间点TG2mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)，BaxmRNA表达水平无明显变化（P>0.05），Bax蛋白表达明显增加(P<0.01)，胞浆内CytC蛋白水平明显增加(P<0.01)，线粒体内CytC蛋白水平明显降低（P<0.01），细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论：TG2通过与Bax形成混合物而消耗Bax，阻止CytC释放至胞浆，从而抑制肿瘤细胞凋亡。