不可分型流感嗜血杆菌生物膜体外形成规律及其扫描电镜形态学

目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）生物膜（BF）体外形成规律，采用扫描电子显微镜（SEM）观察BF内部结构。方法:以NTHi标准菌株ATCC49247为研究菌株，以铜绿假单胞菌（PA）标准菌株PAO1为阳性对照菌株，同时设空白对照组，分别培养1、2、3、4、5、6和7d时，使用平板计数法和结晶紫染色法检测BF形成情况，并于3d时采用SEM检测ATCC49247的BF结构。结果:平板计数法检测BF内菌落数，ATCC49247和PAO1培养3d时活菌数逐渐上升至最高，而后逐渐下降，至7　d时分别降至（0.8294±0.0075）×107cfu？mL-1和（0.9426±0.0199）×107cfu？mL-1，培养3、4、5和6　d时2组间比较差异均有统计学意义（P<0.05），同种细菌各不同时间点间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结晶紫染色检测BF致密程度，ATCC49247和PAO1培养3d时BF致密度逐渐上升至最高，波长570nm吸光度（A570）值分别为2.717　4±0.017　2和2.885　3±0.039　0，而后逐渐下降，至7　d时分别降至0.1517±0.0745和1.1969±1.1085，各时间点2组细菌与空白组比较差异均有统计学意义（P<0.05），培养3、4和5d时2组细菌间比较差异均有统计学意义（P<0.05），同种细菌不同时间点比较差异有统计学意义（P<0.05）。SEM观察，培养3d时ATCC49247形成了典型的BF结构。结论:ATCC49247可以在体外形成BF，结晶紫染色、平板计数和扫描电镜可作为检测BF的常规手段。