RNA干扰FZD4基因表达对人胶质瘤干细胞自我更新能力的抑制作用

目的:探讨FZD4在人胶质瘤干细胞自我更新能力中的作用,并阐明其作用机制。方法:针对人的FZD4设计了2条短发夹RNA(shRNA)序列,利用慢病毒包装后感染人胶质瘤U251细胞(FZD4shRNA干扰组分为FZD4-shRNA-1#和FZD4-shRNA-2#组),经空病毒感染的U251细胞为对照组。倒置显微镜观察感染的U251细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,通过RT-PCR和免疫印迹法检测各组细胞中FZD4mRNA和蛋白表达水平。利用干细胞培养基筛选出胶质瘤干细胞,采用极限稀释实验观察FZD4shRNA对肿瘤干细胞增殖及自我更新的影响。结果:与对照组比较,FZD4shRNA干扰组FZD4mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,FZD4shRNA干扰组中干细胞形成的神经球直径明显缩小(P<0.01)。极限稀释实验,与对照组比较,FZD4shRNA干扰组干细胞在每个孔中生成至少1个神经球所需要的细胞数明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论:通过shRNA下调U251细胞中FZD4的表达后可以显著抑制胶质瘤肿瘤干细胞的自我更新能力。