桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:培养结肠癌SW480细胞,传代后用于实验。SW480细胞分为对照组和不同剂量桦木醇(1、5、10、20、50和100mg·L-1)组,MTT法测定各组细胞的增殖抑制率;以不加桦木醇的SW480细胞为对照组,DAPI染色观察15mg·L-1桦木醇作用SW480细胞6、12和24h后的形态学变化;流式细胞术分析Sub-G1细胞百分比即细胞凋亡率,体外caspase活力测定法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的激活情况,Westernblotting法检测各组细胞caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)断裂和凋亡蛋Bcl-2、Bcl-xL和cytochromeC的表达情况。结果:MTT法检测,与对照组比较,随着桦木醇剂量(1、5、10、20、50和100mg·L-1)增加SW480细胞的增殖抑制率逐渐增加(P<0.05或P<0.01),其增殖抑制率呈剂量效应关系,半数抑制浓度(IC50)为12.875mg·L-1。DAPI染色,与对照组比较,15mg·L-1桦木醇组正常细胞数量减少,在12和24h时呈现出典型的细胞凋亡特征(膜气泡,核固缩、变形及染色质浓缩等)。流式细胞术检测,与对照组比较,随着作用时间的延长,15mg·L-1桦木醇组SW480细胞中处于Sub-G1期的细胞逐渐增多,即细胞凋亡率逐渐增加。caspase活力测定,与对照组比较,caspase-3和caspase-9活性明显增加(P<0.05或P<0.01)。免疫印迹检测,与对照组比较,15mg·L-1桦木醇组SW480细胞中PARP出现断裂,凋亡蛋白Bcl-xL表达下调,cytochromeC表达上调,而Bcl-2蛋白表达无明显变化。结论:桦木醇可抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过下调Bcl-xL表达启动线粒体介导的cytochromeC释放进而激活caspase-9凋亡途径实现。