类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达

目的：构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒，并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法：采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板，扩增出SUMO3全长编码序列（312bp），并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶（GST）融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中，酶切、测序鉴定获得重组质粒。将重组质粒转化E.coliBL21，异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导产生GST-SUMO3的融合蛋白，并纯化获得相对分子质量为38000的融合蛋白。结果：通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切，确定了重组质粒pGEX-4T-1/SUMO3中包含有312bp的小片段，并测序鉴定该插入片段序列与SUMO3序列一致；在终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG诱导时，GST-SUMO3的融合蛋白也被成功地表达和纯化。结论：成功地制备和纯化了类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白，为SUMO3多克隆抗体的制备提供了抗原基础，同时也为SUMO3及SUMO第二类家族功能的深入研究提供了保证。