表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用

目的：构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据。方法：构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP，利用FugeneHD转染猪胚胎成纤维细胞（PEF）和MCF-7细胞系，利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。结果：成功构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP，将2个载体瞬时共转染PEF；经潮酶素B筛选出Cre重组酶稳定表达的MCF-7细胞系瞬时转染pStop-eGFP，在荧光显微镜下观察2种细胞均有绿色荧光蛋白的表达。而单独转染pStop-eGFP的MCF-7细胞系和PEF均未见绿色荧光蛋白的表达。结论：重组载体Cre-pCEP4在细胞内能够表达Cre重组酶，并且表达的Cre重组酶能够识别loxP位点，删除两同向loxP间的DNA片段。