NOD小鼠CD8α+抗原基因克隆载体的构建及其相关蛋白在树突状细胞中的表达

目的：构建NOD小鼠CD8α+抗原基因重组慢病毒载体，探讨其在树突状细胞（DCs）中的表达，阐明1型糖尿病（T1DM）的发病机理。方法：设计CD8α+基因特异性引物，从NOD小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA，采用RT-PCR法扩增CD8α+基因，与质粒载体pCDF1-MCS2-EF1-COPGFP进行连接重组，经过转化、筛选、鉴定和序列测定后，应用Westernblotting法检测CD8α+基因的表达。应用Nanofectin脂质体转染试剂将含有目的基因的质粒转染HEK293细胞，进行重组慢病毒载体包装，将包装后的重组慢病毒颗粒感染DCs，采用Westernblotting法检测CD8α+蛋白的表达。结果：成功构建了NOD小鼠CD8α+抗原基因的重组质粒载体，重组表达载体经转染HEK293细胞获得了重组病毒的原液，重组病毒扩增后感染DCs，免疫荧光下可见DCs内含有绿色荧光蛋白(GFP)表达。结论：NOD小鼠CD8α+抗原基因重组病毒载体构建成功，且有相关蛋白表达。