Humanin抑制NR1亚基表达和NR2B亚基磷酸化的神经保护作用

目的：探讨Humanin（HN）通过抑制N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化在兴奋性神经毒中发挥的保护作用，并阐明其可能的作用机制。方法：利用原代培养的Wistar大鼠皮层神经元建立NMDA诱导的兴奋性神经毒模型,将神经元分为对照组、NMDA组、NMDA+MK-801（MK-801）组和NMDA+HN（HN）组。流式细胞术荧光定量检测各组神经元膜NMDA受体NR1亚基蛋白的表达，Westernblotting法检测各组神经元膜NMDA受体NR2B亚基Tyr1472位点的磷酸化水平。结果：倒置相差显微镜观察，NMDA组中的神经元胞体肿胀，个别细胞变成圆形，胞体周围光晕模糊，神经元突起大部分消失，表现出明显的神经毒性作用。流式细胞术免疫荧光定量检测，与对照组比较，NMDA组NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显增加（P<0.05）；与NMDA组比较，MK-801组和HN组的NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显降低（P<0.05）。Westernblotting法检测，各组神经元的NR2B亚基总蛋白的表达水平无改变；与对照组比较，NMDA组NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平明显升高（P<0.05）；与NMDA组比较，MK-801组和HN组均能降低NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平（P<0.05）。结论：NMDA受体NR1亚基蛋白表达水平的增加和NR2亚基磷酸化可能参与NMDA诱导的兴奋性神经毒作用；HN可能通过抑制NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化而发挥对神经元的保护作用。