ODDD调控EGFP基因的乏氧特异表达载体的构建及其意义

［摘要］目的：构建乏氧诱导因子的氧依赖降解结构域（ODDD）调控的乏氧特异性表达荧光报告载体，探索其乏氧调控目的基因表达的可行性。方法：基因重组技术构建含有序列ODDD403-601aa、ODDD549-575aa和其2串联体调控增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光报告载体。φA细胞中瞬时表达EGFP，应用RT-PCR技术、Westernblotting技术和流式细胞术检测ODDD调控EGFP乏氧特异性表达。结果：克隆得到了ODDD/EGFP表达载体，进行细胞转染实验，在细胞中成功表达EGFP。Westernblotting检测，ODDD可以调控EGFP乏氧特异性表达。流式细胞术检测，正常氧浓度下细胞转染pEGFP-ODDD401-603、pEGFP-ODDD549-575和pEGFP-ODDD2(549-575)EGFP的荧光强度分别为（6.06±1.97）％、（11.99±1.13）％和（23.16±2.79）％，低于缺氧条件下EGFP的表达量(P<0.05)。结论：ODDD对靶基因对氧的反应性调节受细胞内的蛋白酶影响；ODDD的调控作用发生在翻译后的蛋白水平，且与细胞内蛋白酶系统功能密切相关。