单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用

目的：制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌（LM）多克隆抗体，并初步探讨其在乳胶凝集试验(LAT)中的应用。方法：复苏并扩大培养LM标准菌株，制备灭活疫苗免疫家兔，采用ELISA法测定耳缘静脉血抗体效价。4次免疫后，颈动脉采血分离血清，采用辛酸-饱和硫酸铵法粗分离，经蛋白亲和层析柱HiTrapProteinGHP进行IgG纯化，采用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法、间接ELISA法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价。得到的高效价提纯IgG与乳胶微球进行共价偶联，并选择偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件，建立快速检测模拟样品中LM的方法。结果：制备并纯化的兔抗LMIgG蛋白浓度为23.364g·L-1，效价为1∶12800~1∶25600，与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应，与斯氏李斯特菌有弱交叉反应；致敏时IgG与乳胶微球偶联比率为1∶40;利用LAT方法检测246份样品，阳性检出率为87.5％，最低检出抗原含量为0.0398g·L-1。结论：制备了高效价、高纯度的兔抗LM多克隆抗体；建立的LAT方法特异性强，敏感性较高，重复性好，便于基层推广使用，为LM的现场检测提供了一种新手段。